مطالعه گلبولهاي سفيد خون انسان روي يک گسترش خوني در زيرميکروسکوپ نوري
جهت مشاهده گلبولهای سفید خون در زیر میکروسکوپ باید مقدمات کار را آماده سازیم .
I-خونگیری از شخص
II - تهیه گسترش خونی
III- ثابت کردن خون رو ي لام(گسترش خونی)
IIII- رنگ آمیز ي گسترش خونی
I- خونگیری : خون باید با يک ماده ضد انعقاد مخلوط شود .چون خون منعقد براي اين آزمايش بي فايده است.
ماده ضد انعقاد مناسب اين آزمايش يک نوع نمک بنامEDTA (اتيلن دي آمين تنرا استيک اسيد) است
II- تهيه گسترش خوني:
وسيله کار:
1- دو عدد لام يک بار مصرف تميز
2 - لوله موئينه ساده
نمونه خون حاوي ماده ضد انعقاد EDTA را به آرامي خوب مخلوط ميکنيم .
يک قطره خون را بوسيله لوله موئينه در يک سانتيمتري انتهاي لام (ب ) قرار ميدهيم . لبه لام (الف) را با زاويه (20) درجه بر روي قطره خون قرار مي دهيم .
لحظه اي بعد خون درسراسر لبه لام (الف ) يعني فصل مشترک دولام ا نتشار مي يابد .
اکنون لام الف را با زاويه (20) درجه با يک فشارملايم و با سرعت يکنواخت در سطح لام (ب )به سمت جلوحرکت ميدهيم .
گسترش خوني آماده شد . مي گذاريم خون سطح لام خشک شود. سپس در حاشيه گسترس توسط مداد مشخصات شخص آزمايش شونده را مي نويسيم.
III- ثابت کردن خون روي لام : ثابت کردن يا فيکس کردن خون روي لام توسط الکل متانول انجام مي گيرد
روي سطح لام خوني قطره قطره الکل متانول ميريزيم . بطوريکه الکل تمام سطح لام خوني را فرا گيرد . صبر مي کنيم تا الکل روي سطح لام خوب خشک شود.(اين عمل را ثابت کردن لام خوني با الکل گويند.)
IIII - رنگ آميزي گسترش خوني : توسط محلول رنگ گيمسا :
رنگ گيمسا را به نسبت يک به ده با آب رقيق ميکنيم.
( 1ccرنگ گيمسا +cc 9آب)روي سطح لام خوني (که ثابت شده است)
رنگ رقيق شده مي ريزيم. بعد ازگذشت 20تا 30 دقيقه رنگ روي لام را دورميريزيم.لام را زير شير آب با جريان ملايم گرفته تا رنگ هاي اضافي خوب شسته شود. حالا سلول هاي خوني روي لام رنگ گرفته اند. ميگذاريم لام خشک شود. سپس روي لام
يک قطره روغن ايمرسيون مي چکانيم بعد زير ميکروسکوپ با عدسي شيئيX 100 لام را مورد مطالعه قرار مي دهيم. در تمام مراحل موظب باشيد لام را پشت و رو نه گذاشته باشيد.
مطالعه گلبولهاي سفيد خون روي يک گسترش خوني شخص طبيعي
مرفولوژي گلبولهاي سفيد خون:
1-نوتروفيل ها (پلي مورف نوکلئوئرها): کروي شکل اند , قطر آنها15-10 ميکرون است, هسته آنها چند قسمتي (لبوله ) که تکه هاي هسته به وسيله رشته هاي نازک کرماتين بهم اتصال دارند.تعداد لب هاي هسته درحالت نرمال
( 5-2)عدد است.
2- لنفوسيت ها:قطري حدود 12-8 ميکرون دارند .هسته آنها گرد ويک پارچه, پر رنگ با کروماتين فشرده ومتراکم ,هسته حدود 90 درصد سيتوپلاسم سلول را پر کرده است.
3- منوسيت ها : بزرگترين سلول درجريان خون انسان محسوب مي شوند.هسته منوسيت لوبيائي , کليه اي يا به شکل مغز است .کروماتين هسته سلول ظريف , کم رنگ است .سيتوپلاسم اين سلول زياد وآبي روشن است.داخل سيتوپلاسم دانه هاي ريز فلفلي ديده مي شود . گاهي داخل سيتوپلاسم منوسيت واکوئل مشاهده مي شود.
ائوزينوفيل ها:اين سلول ها داراي هسته لوبوله هستند , تعداد لوب هاي هسته معمولا دو عدد است, مشخصه اين سلول وجود دانه هاي اختصاصي درشت و فراوان در داخل سيتوپلاسم سلول است. رنگ اين دانه ها نارنجي است , دانه ها روي هسته سلول را نمي پوشانند.
بازوفيل ها : يک هسته کم رنگ چند قسمتي دارند .ويژگي مهم اين سلول ها وجود دانه هاي نسبتا زياد سياه رنگ در داخل سيتوپلاسم سلول که اين دانه هاحتي روي هسته سلول را پوشانده اند .بطوريکه هسته سلول به سختي ديده مي شود.
